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流式熒光法不僅能高通量檢測抗原,還能高通量檢測核酸?!”热缯f常見的項目HPV分型,就非常合適用流式熒光法檢測。然而如果僅僅只靠核酸雜交來獲得信號,很難達到理想的靈敏度(雖然是懸浮芯片,但也是固液相反應效率肯定不如液液反應效率)。因此懸浮芯片會采用先擴增,再雜交的方法來放大信號,提高檢測的靈敏度。為什么不在球上直接做擴增反應了。這涉及到了熒光編碼微球是否耐熱的問題。為了考察碧芯生物Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球是否耐熱,我們做了一下研究工作。
碧芯生物的Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球能不能做雜交?
可以,在95度 3分鐘,48度1小時的雜交條件下,能獲得較好的熒光信號(條件還在優(yōu)化中,歡迎咨詢)
能不能直接再球上擴增,碧芯生物做了兩個嘗試?
1 等溫擴增。在球上直接進行滾環(huán)擴增(RCA, 文章已發(fā)表,doi.org/10.1016/j.cclet.2023.108141)和重組酶介導鏈替換核酸擴增技術(RAA,文章在投)
2 PCR反應。目前市面上多數(shù)的熒光編碼微球都難以耐受PCR的熱循環(huán),因此很少見到有直接在磁性熒光編碼微球上進行PCR再流式高通量分析核酸分子的產品。為了填補這一塊的空白,碧芯生物科技從我們在售的6微米羧基修飾的磁性熒光編碼微球中篩選出由23種耐95度的磁性熒光編碼微球的陣列,供需要在微球表面進行PCR反應的用戶選擇。圖1為23群微球的陣列)
圖1:左圖為23群磁性熒光編碼微球未PCR的流式圖;右圖為23群微球經(jīng)過一個PCR流程后的流式圖
綜上所述, 碧芯生物Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球有著的熱穩(wěn)定性,不管您是PCR完了做雜交,還是直接在球上PCR, 碧芯生物Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球都可以幫您建立穩(wěn)定的檢測體系。
PCR熱循環(huán)程序:
溫度(℃) | 時間(s) | 循環(huán)數(shù)(Cycle) |
94 | 180 | 1 |
94 | 30 |
31 |
58 | 30 | |
72 | 30 | |
72 | 300 | 1 |
4 | holding | 1 |