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流式熒光法( CBA)檢測細胞因子之優(yōu)勢分析

更新時間:2023-02-16點擊次數(shù):4516

細胞因子是由免疫細胞(如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等)和某些非免疫細胞(內(nèi)皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質(zhì)。具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細胞生成、細胞生長、APSC多能細胞以及損傷組織修復等多種功能。細胞因子可被分為白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子

細胞因子在體內(nèi)具有重要的病理指示作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,很多細胞因子的表達水平會發(fā)生顯著變化。通過對體液中細胞因子濃度的檢測可以對疾病診斷和治療做出相應(yīng)評價,具有重要的研究及臨床應(yīng)用價值。由于血清、細胞培養(yǎng)上清、積液中的細胞因子含量低,不容易檢測,加上樣本數(shù)量少,傳統(tǒng)的方法無法滿足多細胞因子檢測。如傳統(tǒng)ELISA方法,一次只能檢測一種細胞因子,如果需要檢測10種細胞因子,需要的樣本量10,且需要進行多次重復操作,耗費了大量的樣本量和人力成本。

流式編碼微球芯片技術(shù)(Cytometric Bead Array, CBA),是用流式細胞儀對多重蛋白進行定量檢測的方法,能夠同時對樣本中的多個指標進行定性、定量檢測,可應(yīng)用于細胞因子檢測。目前CBA 檢測系統(tǒng)采用聚苯熒光編碼微球(有磁性/非磁性)連結(jié)特定的捕獲抗體,捕捉待測物,同時再加入待測物的熒光抗體,三者形成夾心復合物,通過流式細胞儀進行檢測。流式細胞術(shù)的優(yōu)點是同時可以進行多參數(shù)檢測,快速并且信息量大,其優(yōu)勢體現(xiàn)在:

(1)能夠同時對單個樣本進行多種檢測

血清Th1/Th2/Th17 相關(guān)細胞因子是實驗中經(jīng)常會用到的檢測指標,然而實驗室常用的模式動物小鼠的血清量少,很難運用傳統(tǒng)的方法如ELISA法進行多因子檢測,而CBA 法正好能解決這一問題。碧芯生物的Beadstar-mPlexTM系列的多細胞因子檢測試劑盒是基于CBA技術(shù)的細胞因子檢測試劑盒,只需要一份樣品,就能同時定量檢測小鼠血清中的10種細胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、MCP-1、IFN-γ、TNF-α、IL-12p70、IL-1β),可滿足大多數(shù)研究的需求。

(2)所需樣本量少、靈敏度高等

傳統(tǒng)ELISA方法每項實驗樣本用量50-200 μl,基于CBA檢測方法的碧芯生物的Beadstar-mPlexTM多細胞因子檢測試劑盒樣本用量僅需要20 μl,大部分指標的線性范圍在3-2500 pg/mL。對于稀有樣本,即使?jié)舛容^低,Beadstar-mPlexTM多細胞因子檢測試劑也可定量同時檢測到多個細胞因子的表達水平。

3)穩(wěn)定性好

流式細胞術(shù)檢測用于細胞因子檢測是一種高通量、快速、重復性好并能準確定量的方法。能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號失真導致的假陽性

(4)檢測流程短,操作簡單。

相比較于ELISA試劑盒的繁瑣操作,CBA操作更為簡單迅速。Beadstar-mPlexTM系列的產(chǎn)品采用的是磁性熒光編碼微球。通過磁分選作用,將未反應(yīng)物去除,可省去大量重復離心清洗步驟。

(5)檢測率高(碧芯生物的Beadstar-mPlexTM多細胞因子*優(yōu)勢):由于正常人的血清中細胞因子濃度較低,在實際檢測中,目前大部分基于CBA試劑盒對正常人血清中各細胞因子的檢出率不高,一些血清樣本的熒光值甚至低于對照品濃度為0時的熒光值。結(jié)果的準確性不高,究其原因主要是熒光編碼微球?qū)晒鈾z測抗體的非特異吸附較強,導致噪音較高(噪音為對照品為0時的檢測熒光值-微球本底檢測熒光值)。當檢測低值血清樣本中,血清中存在復雜的蛋白質(zhì)體系,不可避免這些蛋白質(zhì)同樣會與微球產(chǎn)生非特異性吸附,從而與熒光檢測抗體競爭非特異性吸附位點,使最終的熒光檢測值下降。因此減少熒光編碼微球?qū)晒鈾z測抗體的非特異性吸附可顯著提升低值血清樣本檢測的準確性。碧芯生物科技(海南?。┯邢薰就ㄟ^不斷摸索和優(yōu)化實驗條件,通過合成一種特殊的三種粒徑不同的微球,再用Avidin修飾微球表面,最終構(gòu)建了約60種低吸附的熒光編碼微球。與普通的熒光編碼微球相比,這些被特殊的的微球具有對蛋白質(zhì)低非特異性吸附的特點。因此,用這種包裹好的熒光編碼微球構(gòu)建的抗原檢測試劑的噪音值明顯降低,可顯著提升靈敏度及低值血清樣本的檢出率

指標名稱

碧芯生物Beadstar-mPlex 檢出率

某進口品牌細胞因子檢出率

IL-2

20/20100%

15/2075%

IL-4

12/2060%

4/20 (20%)

IL-6

18/2090%

10/20 (50%)

IL-10

20/20100%

4/20 (20%)

IL-17A

11/2055%

9/20 (45%)

TNF-α

18/2090%

4/20 (20%)

IFN-γ

17/2085%

3/20 (15%)




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